Rab27A ja Rab35 -proteiinit munasarjasyöpäsolujen eksosomierityksessä - Toivanen, Kirsi (My University, 2019)
Eksosomit ovat pieniä solunulkoisia vesikkeleitä, jotka toimivat viestinvälittäjinä solujen välillä vaikuttaen vastaanottajasolun aineenvaihduntaan ja geenien ilmentymiseen. Eksosomien tuotannon on todettu muuttuneen monissa sairauksissa kuten syövässä, missä ne voivat muuttaa ympäristön syövälle suotuisammaksi vaikuttaen taudin syntyyn, aggressiivisuuteen ja leviämiseen. Solunsisäisiin kalvokuljetuksiin osallistuvat Rabproteiinit ovat keskeisessä osassa eksosomien biosynteesissä. Tässä erikoistyössä tutkittiin kahta Rab-proteiinia, Rab27A:ta ja Rab35:tä, sekä selvitettiin niiden toiminnan häirinnän vaikutuksia korkean pahanlaatuisuusasteen seroosin tyypin munasarjasyövän (HGSOC) soluissa. Erikoistyössä käytettiin solumalleina kaupallisia solulinjoja ja potilasperäisiä soluviljelmiä. Kattavien karakterisointien perusteella valituista soluista hiljennettiin Rab27A ja Rab35 -geenit lentivirusvälitteisillä shRNA-molekyyleillä. Geenien transkripition ja translaation hiljentymisen onnistuminen varmistettiin Taqman qRTPCR- ja Western Blot-menetelmillä. Lopuksi tutkittiin hiljennyksen mahdollisia vaikutuksia solujen ulkonäköön, liikkumiskykyyn ja eksosomien tuotantoon. Työn tuloksena saatiin valmistettua kaksi solulinjaa, joista pystyttiin todentamaan kummankin kohdegeenin hiljentyminen. Rab27A:n hiljentäminen aiheutti muutoksia solujen ulkonäössä ja myös eksosomituotannon havaittiin vähentyneen. Tähän mennessä tehtyjen kokeiden perusteella Rab35:n hiljentämisellä ei ole havaittu samankaltaisia muutoksia soluissa. Koska eksosomien on ehdotettu olevan potentiaalisia kohteita syövän diagnoosissa ja hoidoissa, vähemmän eksosomeja tuottavia soluja voitaisiin käyttää solumalleina jatkotutkimuksissa eksosomien rooleista syövän mikroympäristössä.
Keywords: Eksosomi, HGSOC, Rab27A, Rab35