Bufonidae-konnien erittämät bufadienolidit: analysointi LC-MS/MS-menetelmillä - Värri, Terhi (My University, 2025)
Bufadienolidit ovat Bufonidae-heimoon kuuluvien rupikonnien eritteistä löydettäviä steroidirakenteisia yhdisteitä, joilla on havaittu voimakkaita biologisia vaikutuksia, kuten kardiotonisia, syöpäsoluja estäviä ja anti-inflammatorisia ominaisuuksia. Niiden rakenteelle on ominaista steroidirunko, jossa C17-asemassa on kuusihiilinen laktonirengas. Bufadienolidit voivat esiintyä vapaina (bufageniinit) tai konjugoituneina (bufotoksiinit), mikä vaikuttaa niiden farmakologisiin ja kemiallisiin ominaisuuksiin Näiden yhdisteiden pitoisuudet ja koostumukset vaihtelevat lajeittain, yksilöittäin ja ympäristötekijöiden mukaan, mikä tekee niiden analysoinnista haastavaa. Näytteiden esikäsittelyllä, erityisesti kuivausmenetelmällä on suuri merkitys yhdisteiden säilyvyyteen. Bufadienolideja tutkitaan yleisimmin perinteisistä valmisteista, kuten Chan Su:sta, ja niiden laadunvarmistus on välttämätöntä kapean terapeuttisen alueen ja toksisuuden vuoksi. Analytiikassa nestekromatografiaan perustuvat massaspektrometriset menetelmät, erityisesti LC-MS/MS, ovat keskeisiä. Ne mahdollistavat sekä kvantitatiivisen että kvalitatiivisen analyysin, fragmentaatioreittien tarkastelun sekä rakenteellisesti samankaltaisten yhdisteiden erottamisen. DAD-, TOF-MS- ja Orbitrap-MS-tekniikoita käytetään usein parantamaan analyysin tarkkuutta ja erottelukykyä. DAD (diodirividetektio) perustuu UV-absorptioon ja soveltuu erityisesti kohdennettuihin, tunnettuihin yhdisteisiin, mutta se ei tarjoa tietoa yhdisteen massasta. TOF-MS (Time-of-Flight Mass Spectrometry, lentoaikamassaspektrometria) tarjoaa korkean tarkkuuden m/z-mittauksia, mutta sen herkkyys matalissa pitoisuuksissa on rajallinen. Orbitrap-MS puolestaan tunnetaan erittäin korkeasta massatarkkuudesta ja erinomaisesta kyvystään analysoida metaboliitteja ja rakenteellisia muutoksia. Näiden menetelmien yhdistäminen mahdollistaa syvällisemmän analyysin ja laajemman profiloinnin, mikä on tarpeen tällaisilla yhdisteillä, jotka esiintyvät pääsääntöisesti pieninä pitoisuuksina ja niillä on monimutkaisia metaboliitteja. LC-MS/MS ja siihen yhdistetyt korkean erotuskyvyn kromatografiset menetelmät tarjoavat tehokkaimmat työkalut bufadienolidien havaitsemiseen ja karakterisointiin. Tulevaisuudessa tutkimus keskittyy entistä enemmän yhdisteiden synteettiseen muokkaamiseen, farmakologisen tehon parantamiseen ja in vivo- metabolomiikan hyödyntämiseen, mikä voi avata mahdollisuuksia lääkekehitykselle.
Keywords: bufadienolidi, Bufonidae-rupikonna, fragmentaatio, nestekromatografia, tandemmassaspektrometri