Kiintokantajalle immobilisoitujen biotinyloitujen sitojavasta-aineiden karakterisointi immunometrisen vieritestausjärjestelmän testikuppien laadunvalvonnassa - Kylä-Nikkilä, Elsa (My University, 2025)
Kuivakemiateknologiaan perustuvalla immunometrisellä vieritestijärjestelmällä erilaisia analyyttejä voidaan määrittää käyttäjän kannalta yksinkertaisesti, koska järjestelmän käyttämät analyyttikohtaiset testikupit sisältävät yleispuskuria lukuun ottamatta kaikki analyytin määrittämiseen näytteestä tarvittavat reagenssit. Valmistusvaiheessa analyytin tunnistava biotinyloitu sitojavasta-aine immobilisoidaan testikuppien streptavidiinipinnalle. Biotinyloidulla sitojavasta-aineella on keskeinen rooli immunomäärityksen toiminnan kannalta: se sitoo tutkittavan analyytin testikupin pohjalle ja mahdollistaa pitoisuuden määrittämisen analyyttiin sitoutuvan leimavasta-aineen signaalin perusteella. Vaihtelut biotinyloidun sitojavasta-aineen määrässä ja jakautumisessa testikupin pinnalla heikentävät testin luotettavuutta. Tämän vuoksi testikuppivalmistuksessa pitää hyödyntää sellaista laadunvalvontamenetelmää, joka pystyy tarjoamaan tietoa sitojavasta-ainepintojen tasalaatuisuudesta. Työn toimeksiantaja harkitsee laadunvalvontaprosessiensa muuttamista nykyisestä lopputuotetta analysoivasta tavasta sellaiseksi, jossa tuotetta analysoidaan laadunvalvonnalla jokaisen kriittisen tuotantovaiheen jälkeen. Työssä tutkittiin kahta eri karakterisointimenetelmää, joiden avulla voitaisiin tutkia sitojavasta-aineiden immobilisaatioprosessin lopputulosta. Ensimmäinen menetelmä hyödyntää leimattua streptavidiinia, joka tunnistaa levypinnalle sitoutuneet biotinyloidut sitojavasta-aineet niissä olevien ylimääräisten biotiinien kautta. Toinen työssä käsiteltävistä menetelmistä perustuu leimatun analyytin, tässä työssä CRP:n, käyttöön. Leimatulla streptavidiinilla on leimattua analyyttiä laajemmat käyttömahdollisuudet, koska leimattua streptavidiinia hyödyntämällä voidaan analysoida eri analyyttien mittaamiseen tarkoitettuja kuppeja yhtä määritystapaa ja reagenssia hyödyntäen. Työssä tehtyjen kokeiden perusteella leimattu streptavidiini sopii myös suorituskykyominaisuuksiltaan leimattua CRP:tä paremmin toimeksiantajan tarpeisiin.
Keywords: Biotinyloitu sitojavasta-aine, leimattu streptavidiini, leimattu analyytti, kiintokantaja, kuivakemia, immunomääritykset, laadunvalvonta