Antigeeniosoitustestin kehitys Clostridium difficile-infektiolle
Mäkilä, Jenna (2016-11-08)
Antigeeniosoitustestin kehitys Clostridium difficile-infektiolle
Mäkilä, Jenna
(08.11.2016)
Tätä artikkelia/julkaisua ei ole tallennettu UTUPubiin. Julkaisun tiedoissa voi kuitenkin olla linkki toisaalle tallennettuun artikkeliin / julkaisuun.
Turun yliopisto
Kuvaus
Siirretty Doriasta
Tiivistelmä
Clostridium difficile -bakteerin aiheuttama infektio (CDI) on yleisin terveydenhuoltoon ja antibioottien käyttöön liitetty ripulin aiheuttaja. C. difficile leviää itiöinä erityisesti sairaaloissa ja hoivakodeissa. Taudinkuva vaihtelee oireettomasta kolonisaatiosta vakavaan paksusuolen tulehdukseen. C. difficile voi kolonisoida paksusuolen, jos suoliston oma bakteeritasapaino on häiriintynyt esimerkiksi antibioottikuurin seurauksena. Varsinaiset CDI:n oireet aiheutuvat bakteerin tuottamista toksiineista A ja B. Toksiineja tuottaa vain osa C. difficile -kannoista. CDI:ta ei voida erottaa kliinisten oireiden perusteella muista ripulinaiheuttajista, joten on tärkeää varmistaa taudinaiheuttaja diagnostisella testillä oikean hoidon varmistamiseksi. Kansainvälisten suositusten mukaan CDI:n diagnostiikka perustuu kaksi- tai kolmivaiheeseen testaukseen. Ensimmäisen vaiheen testin tulisi havaita C. difficile -bakteeri erittäin herkästi ja toisen tulisi olla erittäin spesifinen oireita aiheuttaville toksiineille.
Diplomityön tavoitteena oli tutkia automatisoidun mariPOC®-testijärjestelmän soveltuvuutta suositusten mukaiseen CDI:n diagnostiikkaan. Työssä kehitettiin mariPOC®:n hyödyntämään ArcDiaTM TPX -määritystekniikkaan moniparametrinen CDI-antigeeniosoitustesti ulostenäytteille. Kohteena CDI:n osoituksessa olivat C. difficilen pintaproteiini glutamaatti-dehydrogenaasi (GDH) sekä toksiinit A ja B. Herkällä GDH-osoituksella seulottiin näytteestä C. difficile. Toksiinien osoituksella todennettiin havaitun C. difficile -kannan tuottavan toksiineja. CDI-prototyyppitestin suorituskykyä tutkittiin vertaamalla sitä kahteen kaupalliseen lateraalivirtaustestiin (engl. lateral flow test, LF). Toksiiniosoitusten positiiviset tulokset varmennettiin toksiini B -geenin tunnistavalla polymeraasiketjureaktiolla (engl. polymerase chain reaction, PCR).
CDI-prototyyppitestin analyyttinen herkkyys GDH:lle oli 9,3 × 104 bakteeria/ml, toksiini A:lle 0,10 ng/ml ja toksiini B:lle 0,15 ng/ml. Kehitetyt toksiinien osoitustestit olivat analyyttisesti LF-testejä herkempiä. GDH-osoitus oli analyyttisesti yhtä herkkä kuin LF-testit. Kliinisillä näytteillä GDH-osoituksen herkkyys oli 99 % ja spesifisyys 90 % verrattaessa LF-testeihin. Toksiinien osoituksen herkkyys oli 89 % ja spesifisyys 100 % verrattaessa LF-testeihin ja PCR-varmistukseen. Tulokset osoittivat, että mariPOC®-testijärjestelmä soveltuisi hyvin kansainvälisten suositusten mukaiseen CDI:n osoitukseen ulostenäytteestä. Työssä tunnistettiin selkeitä jatkokehitysmahdollisuuksia testin herkkyyden ja spesifisyyden parantamiseksi edelleen.
Diplomityön tavoitteena oli tutkia automatisoidun mariPOC®-testijärjestelmän soveltuvuutta suositusten mukaiseen CDI:n diagnostiikkaan. Työssä kehitettiin mariPOC®:n hyödyntämään ArcDiaTM TPX -määritystekniikkaan moniparametrinen CDI-antigeeniosoitustesti ulostenäytteille. Kohteena CDI:n osoituksessa olivat C. difficilen pintaproteiini glutamaatti-dehydrogenaasi (GDH) sekä toksiinit A ja B. Herkällä GDH-osoituksella seulottiin näytteestä C. difficile. Toksiinien osoituksella todennettiin havaitun C. difficile -kannan tuottavan toksiineja. CDI-prototyyppitestin suorituskykyä tutkittiin vertaamalla sitä kahteen kaupalliseen lateraalivirtaustestiin (engl. lateral flow test, LF). Toksiiniosoitusten positiiviset tulokset varmennettiin toksiini B -geenin tunnistavalla polymeraasiketjureaktiolla (engl. polymerase chain reaction, PCR).
CDI-prototyyppitestin analyyttinen herkkyys GDH:lle oli 9,3 × 104 bakteeria/ml, toksiini A:lle 0,10 ng/ml ja toksiini B:lle 0,15 ng/ml. Kehitetyt toksiinien osoitustestit olivat analyyttisesti LF-testejä herkempiä. GDH-osoitus oli analyyttisesti yhtä herkkä kuin LF-testit. Kliinisillä näytteillä GDH-osoituksen herkkyys oli 99 % ja spesifisyys 90 % verrattaessa LF-testeihin. Toksiinien osoituksen herkkyys oli 89 % ja spesifisyys 100 % verrattaessa LF-testeihin ja PCR-varmistukseen. Tulokset osoittivat, että mariPOC®-testijärjestelmä soveltuisi hyvin kansainvälisten suositusten mukaiseen CDI:n osoitukseen ulostenäytteestä. Työssä tunnistettiin selkeitä jatkokehitysmahdollisuuksia testin herkkyyden ja spesifisyyden parantamiseksi edelleen.