Monianalyyttimäärityksen kehittäminen narkolepsiapotilaiden vasta-aineiden tutkimiseksi influenssaviruksen NS1-proteiinia vastaan
Jalkanen, Pinja (2019-03-22)
Monianalyyttimäärityksen kehittäminen narkolepsiapotilaiden vasta-aineiden tutkimiseksi influenssaviruksen NS1-proteiinia vastaan
(22.03.2019)
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
suljettu
Julkaisun pysyvä osoite on:
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019042513322
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019042513322
Tiivistelmä
Narkolepsia on syyltään tuntematon unihäiriö, johon liittyy poikkeava päiväaikainen väsymys ja katapleksia. Vuonna 2010 narkolepsian esiintyvyyden havaittiin kasvaneen A(H1N1)pdm09-viruksen aiheuttaman influenssapandemian jälkeen maissa, joissa käytettiin Pandemrix-influenssarokotetta. Esiintyvyyden havaittiin kasvaneen myös Kiinassa, missä influenssarokotetta ei käytetty. Rokotteiden ja pandeemisen influenssavirusinfektion osuutta narkolepsian synnyssä on tutkittu paljon, mutta yhteys on vieläkin epäselvä. Influenssavirusinfektion sairastaneet potilaat voidaan erotella influenssarokotetuista potilaista tutkimalla vasta-aineita luonnollisessa infektiossa syntyvää ei-rakenteellista säätelyproteiini 1:tä (engl. nonstructural protein 1, NS1) vastaan.
Diplomityön tavoitteena oli kehittää monianalyyttimääritys narkolepsiapotilaiden vasta-aineiden tutkimiseksi kausi-influenssaviruksen ja pandeemisen influenssaviruksen NS1-proteiineja vastaan samanaikaisesti. NS1-proteiinit kloonattiin ja tuotettiin rekombinanttiproteiineina glutationi-S-transferaasi (GST) -fuusioproteiinin kanssa bakulovirustuotantomenetelmällä Spodoptera frugiperda (Sf9) -hyönteissoluissa. Anti-NS1-vasta-aineita tutkittiin immunoblot-menetelmällä käyttäen positiivisena kontrollina influenssaviruksen nukleoproteiinia (NP) ja negatiivisena kontrollina GST-proteiinia. Määrityksen toimivuus testattiin A(H1N1)pdm09-influenssavirukselle vasta-ainepositiivisilla näytteillä. Tarkoituksena oli analysoida 400 potilasnäytettä, joista osa oli narkolepsiapotilailta ja osa kontrolleilta.
NS1-proteiinien tuotto onnistui hyönteissoluissa hyvin, mutta proteiinit tuottuivat huonosti liukoisessa muodossa. NS1-proteiinien puhdistus luonnollisessa konformaatiossa ei onnistunut, joten proteiinit eroteltiin puhdistamattomina immunoblot-määrityksessä. Seerumissa olevat vasta-aineet tunnistivat spesifisesti NP-proteiinin ja eri influenssakantojen NS1-proteiinit, eikä epäspesifistä sitoutumista GST-proteiiniin tai muihin määrityksen komponentteihin esiintynyt. Potilasnäytteiden tutkiminen on vielä kesken.
Diplomityön tavoitteena oli kehittää monianalyyttimääritys narkolepsiapotilaiden vasta-aineiden tutkimiseksi kausi-influenssaviruksen ja pandeemisen influenssaviruksen NS1-proteiineja vastaan samanaikaisesti. NS1-proteiinit kloonattiin ja tuotettiin rekombinanttiproteiineina glutationi-S-transferaasi (GST) -fuusioproteiinin kanssa bakulovirustuotantomenetelmällä Spodoptera frugiperda (Sf9) -hyönteissoluissa. Anti-NS1-vasta-aineita tutkittiin immunoblot-menetelmällä käyttäen positiivisena kontrollina influenssaviruksen nukleoproteiinia (NP) ja negatiivisena kontrollina GST-proteiinia. Määrityksen toimivuus testattiin A(H1N1)pdm09-influenssavirukselle vasta-ainepositiivisilla näytteillä. Tarkoituksena oli analysoida 400 potilasnäytettä, joista osa oli narkolepsiapotilailta ja osa kontrolleilta.
NS1-proteiinien tuotto onnistui hyönteissoluissa hyvin, mutta proteiinit tuottuivat huonosti liukoisessa muodossa. NS1-proteiinien puhdistus luonnollisessa konformaatiossa ei onnistunut, joten proteiinit eroteltiin puhdistamattomina immunoblot-määrityksessä. Seerumissa olevat vasta-aineet tunnistivat spesifisesti NP-proteiinin ja eri influenssakantojen NS1-proteiinit, eikä epäspesifistä sitoutumista GST-proteiiniin tai muihin määrityksen komponentteihin esiintynyt. Potilasnäytteiden tutkiminen on vielä kesken.