Fibroblastien vaikutus eturauhassyöpäsolujen migraatioon ja invaasioon 3D-kasvatuksissa
Virtanen, Noora (2019-04-24)
Fibroblastien vaikutus eturauhassyöpäsolujen migraatioon ja invaasioon 3D-kasvatuksissa
(24.04.2019)
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
avoin
Julkaisun pysyvä osoite on:
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019050214008
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019050214008
Tiivistelmä
Eturauhassyövän kantasolut ovat kantasolujen kaltaisia erilaistumattomia syöpäsoluja. Nämä solut ilmentävät paljon α2β1-integriiniä, joka välittää solun sitoutumista soluväliaineeseen erityisesti kollageeni I:n kautta ja joka on tärkeä luumetastaasissa. Soluväliainetta kudoksissa tuottavat muun muassa fibroblastit. Syöpäkasvaimissa esiintyvät fibroblastit vaikuttavat kasvaimen kasvuun, tuottavat soluväliaineen proteiineja, kuten kollageeni I:tä, ja vaikuttavat näin myös syöpäsolujen liikkumiseen.
Erikoistyössä tarkasteltiin fibroblastien vaikutusta syöpäsolujen invaasioon ja migraatioon 3D-kasvatuksissa eli sferoideissa. Kokeissa käytettiin kahta eri eturauhassyöpäsolulinjaa, joita olivat DU145 (kohtalaisesti metastoiva solulinja) ja PC3 (korkeasti metastoiva solulinja). Molemmat linjat ilmentävät lähes yhtä paljon α2-integriiniä. Fibroblasteina käytettiin ihmisen eturauhasen syöpäkasvaimesta eristettyjä primaarifibroblasteja. Solujen invaasiota ja migraatiota tutkittiin kollageeni I:n avulla. Fibroblastien ja syöpäsolujen sijoittumista sferoideissa toisiinsa nähden tarkasteltiin fluoresoivien CellTracker-värien avulla. Massaspektrometrialla ja Western Blot -menetelmällä selvitettiin fibroblastien vaikutusta sferoidien mikroympäristöön.
Invaasion huomattiin lisääntyvän, kun DU145-soluja kasvatettiin yhdessä fibroblastien kanssa. Migraatiokokeissa eroa ei havaittu. PC3-solut eivät muodostaneet sferoideja ilman fibroblasteja, joten fibroblastien vaikutusta PC3-solujen invaasioon ja migraatioon ei voitu määrittää. Verrattaessa yhteisviljelmiä keskenään voitiin havaita, että DU145+fibroblastit -sferoidien solut invasoivat ja migroivat yllättäen enemmän kuin PC3+fibroblastit -sferoidien solut. Lisäksi fibroblastien havaittiin sijoittuvan yhteisviljelmissä eri tavalla. DU145-solujen kanssa fibroblastit sijoittuivat sferoidin reuna-alueille ja PC3-solujen kanssa sferoidin keskiosaan. Massaspektrometritulokset osoittivat useiden proteiinien, esimerkiksi kollageeni XVIII:n fragmentin endostatiinin, ilmentyvän enemmän yhteisviljelmissä. Erot endostatiinin ilmentymisessä osoitettiin myös Western Blot -menetelmällä.
Erikoistyössä tarkasteltiin fibroblastien vaikutusta syöpäsolujen invaasioon ja migraatioon 3D-kasvatuksissa eli sferoideissa. Kokeissa käytettiin kahta eri eturauhassyöpäsolulinjaa, joita olivat DU145 (kohtalaisesti metastoiva solulinja) ja PC3 (korkeasti metastoiva solulinja). Molemmat linjat ilmentävät lähes yhtä paljon α2-integriiniä. Fibroblasteina käytettiin ihmisen eturauhasen syöpäkasvaimesta eristettyjä primaarifibroblasteja. Solujen invaasiota ja migraatiota tutkittiin kollageeni I:n avulla. Fibroblastien ja syöpäsolujen sijoittumista sferoideissa toisiinsa nähden tarkasteltiin fluoresoivien CellTracker-värien avulla. Massaspektrometrialla ja Western Blot -menetelmällä selvitettiin fibroblastien vaikutusta sferoidien mikroympäristöön.
Invaasion huomattiin lisääntyvän, kun DU145-soluja kasvatettiin yhdessä fibroblastien kanssa. Migraatiokokeissa eroa ei havaittu. PC3-solut eivät muodostaneet sferoideja ilman fibroblasteja, joten fibroblastien vaikutusta PC3-solujen invaasioon ja migraatioon ei voitu määrittää. Verrattaessa yhteisviljelmiä keskenään voitiin havaita, että DU145+fibroblastit -sferoidien solut invasoivat ja migroivat yllättäen enemmän kuin PC3+fibroblastit -sferoidien solut. Lisäksi fibroblastien havaittiin sijoittuvan yhteisviljelmissä eri tavalla. DU145-solujen kanssa fibroblastit sijoittuivat sferoidin reuna-alueille ja PC3-solujen kanssa sferoidin keskiosaan. Massaspektrometritulokset osoittivat useiden proteiinien, esimerkiksi kollageeni XVIII:n fragmentin endostatiinin, ilmentyvän enemmän yhteisviljelmissä. Erot endostatiinin ilmentymisessä osoitettiin myös Western Blot -menetelmällä.