Rab27A ja Rab35 -proteiinit munasarjasyöpäsolujen eksosomierityksessä
Toivanen, Kirsi (2019-04-24)
24.04.2019
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
Julkaisun pysyvä osoite on:
http://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019050915038
http://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019050915038
Tiivistelmä
Eksosomit ovat pieniä solunulkoisia vesikkeleitä, jotka toimivat viestinvälittäjinä solujen
välillä vaikuttaen vastaanottajasolun aineenvaihduntaan ja geenien ilmentymiseen.
Eksosomien tuotannon on todettu muuttuneen monissa sairauksissa kuten syövässä,
missä ne voivat muuttaa ympäristön syövälle suotuisammaksi vaikuttaen taudin syntyyn,
aggressiivisuuteen ja leviämiseen. Solunsisäisiin kalvokuljetuksiin osallistuvat Rabproteiinit ovat keskeisessä osassa eksosomien biosynteesissä. Tässä erikoistyössä
tutkittiin kahta Rab-proteiinia, Rab27A:ta ja Rab35:tä, sekä selvitettiin niiden toiminnan
häirinnän vaikutuksia korkean pahanlaatuisuusasteen seroosin tyypin munasarjasyövän
(HGSOC) soluissa.
Erikoistyössä käytettiin solumalleina kaupallisia solulinjoja ja potilasperäisiä
soluviljelmiä. Kattavien karakterisointien perusteella valituista soluista hiljennettiin
Rab27A ja Rab35 -geenit lentivirusvälitteisillä shRNA-molekyyleillä. Geenien
transkripition ja translaation hiljentymisen onnistuminen varmistettiin Taqman qRTPCR- ja Western Blot-menetelmillä. Lopuksi tutkittiin hiljennyksen mahdollisia
vaikutuksia solujen ulkonäköön, liikkumiskykyyn ja eksosomien tuotantoon.
Työn tuloksena saatiin valmistettua kaksi solulinjaa, joista pystyttiin todentamaan
kummankin kohdegeenin hiljentyminen. Rab27A:n hiljentäminen aiheutti muutoksia
solujen ulkonäössä ja myös eksosomituotannon havaittiin vähentyneen. Tähän mennessä
tehtyjen kokeiden perusteella Rab35:n hiljentämisellä ei ole havaittu samankaltaisia
muutoksia soluissa. Koska eksosomien on ehdotettu olevan potentiaalisia kohteita syövän
diagnoosissa ja hoidoissa, vähemmän eksosomeja tuottavia soluja voitaisiin käyttää
solumalleina jatkotutkimuksissa eksosomien rooleista syövän mikroympäristössä.
välillä vaikuttaen vastaanottajasolun aineenvaihduntaan ja geenien ilmentymiseen.
Eksosomien tuotannon on todettu muuttuneen monissa sairauksissa kuten syövässä,
missä ne voivat muuttaa ympäristön syövälle suotuisammaksi vaikuttaen taudin syntyyn,
aggressiivisuuteen ja leviämiseen. Solunsisäisiin kalvokuljetuksiin osallistuvat Rabproteiinit ovat keskeisessä osassa eksosomien biosynteesissä. Tässä erikoistyössä
tutkittiin kahta Rab-proteiinia, Rab27A:ta ja Rab35:tä, sekä selvitettiin niiden toiminnan
häirinnän vaikutuksia korkean pahanlaatuisuusasteen seroosin tyypin munasarjasyövän
(HGSOC) soluissa.
Erikoistyössä käytettiin solumalleina kaupallisia solulinjoja ja potilasperäisiä
soluviljelmiä. Kattavien karakterisointien perusteella valituista soluista hiljennettiin
Rab27A ja Rab35 -geenit lentivirusvälitteisillä shRNA-molekyyleillä. Geenien
transkripition ja translaation hiljentymisen onnistuminen varmistettiin Taqman qRTPCR- ja Western Blot-menetelmillä. Lopuksi tutkittiin hiljennyksen mahdollisia
vaikutuksia solujen ulkonäköön, liikkumiskykyyn ja eksosomien tuotantoon.
Työn tuloksena saatiin valmistettua kaksi solulinjaa, joista pystyttiin todentamaan
kummankin kohdegeenin hiljentyminen. Rab27A:n hiljentäminen aiheutti muutoksia
solujen ulkonäössä ja myös eksosomituotannon havaittiin vähentyneen. Tähän mennessä
tehtyjen kokeiden perusteella Rab35:n hiljentämisellä ei ole havaittu samankaltaisia
muutoksia soluissa. Koska eksosomien on ehdotettu olevan potentiaalisia kohteita syövän
diagnoosissa ja hoidoissa, vähemmän eksosomeja tuottavia soluja voitaisiin käyttää
solumalleina jatkotutkimuksissa eksosomien rooleista syövän mikroympäristössä.