Luustolihasperäistä troponiini I:tä tunnistavien sitojien käyttö immunomäärityksessä
Kantonen, Ellamari (2019-04-16)
Luustolihasperäistä troponiini I:tä tunnistavien sitojien käyttö immunomäärityksessä
(16.04.2019)
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
suljettu
Julkaisun pysyvä osoite on:
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019053118088
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2019053118088
Tiivistelmä
Troponiinit ovat poikkijuovaisten eli sydän- ja luustolihasten supistumista sääteleviä rakenneproteiineja, joita vapautuu verenkiertoon lihasten vaurioituessa. Troponiinit muodostuvat kolmesta alayksiköstä; I, T ja C. Koska I ja T -alayksiköiden sydän- ja luustoperäiset muodot on mahdollista erottaa toisistaan, voidaan verenkierrosta havaittavia sydänperäisiä troponiineja (engl. cardiac troponin, cTn) ja luustolihasperäisiä troponiinja (engl. skeletal troponin, skTn), käyttää spesifisinä lihasvaurioiden merkkiaineina. Tämän seurauksena esimerkiksi cTnI on saavuttanut keskeisen osan sydändiagnostiikassa. Sen sijaan skTnI:n merkitystä luustolihassairauksien diagnosoinnissa ei juuri ole tutkittu. Syynä tähän ovat kaupallisten skTnI-sitojien vähäisyys sekä määritysten puute.
Työn tarkoituksena oli tutkia Turun yliopiston synteettisestä vasta-ainekirjastosta rikastettujen skTnI-sitojien ominaisuuksia herkän immunomäärityksen kehittämiseksi. Työhön valittiin 12 erilaista tuottovektoriin kloonattua yksiketjuisen vasta-aineen vaihtelevan osan sisältävää fragmenttia (engl. single-chain variable fragment, scFv). Vasta-aineet tuotettiin Escherichia coli -bakteerissa ja puhdistettiin metalliaffiniteettikromatografialla. Uusia skTnI-sitojia verrattiin kaupalliseen skTnI:tä tunnistavaan monoklonaaliseen vasta-aineeseen (engl. monoclonal antibody, Mab). Biotinyloitujen sitojien ominaisuuksia, kuten kykyä tunnistaa skTnI:tä, tutkittiin kaksipuoleisella immunomäärityksellä. Määrityksen leimavasta-aineena toimi kaupallinen europium-leimattu skTnI-spesifinen Mab.
Saatujen tulosten perusteella jokainen 12 sitojavasta-aineesta kykeni tunnistamaan näyteperäistä skTnI:tä ja vain kahdella sitojista esiintyi ristireagointia cTnI:n kanssa. Lisäksi uudet sitojat mahdollistivat jopa 10 kertaa paremman analyyttisen herkkyyden kuin verrokkina käytetty Mab-sitoja (1,4 ng/ml). Lopputyössä tuotetut sitojat ovat täten osoittautuneet lupaaviksi herkän ja luotettavan skTnI-määrityksen aikaansaamiselle.
Työn tarkoituksena oli tutkia Turun yliopiston synteettisestä vasta-ainekirjastosta rikastettujen skTnI-sitojien ominaisuuksia herkän immunomäärityksen kehittämiseksi. Työhön valittiin 12 erilaista tuottovektoriin kloonattua yksiketjuisen vasta-aineen vaihtelevan osan sisältävää fragmenttia (engl. single-chain variable fragment, scFv). Vasta-aineet tuotettiin Escherichia coli -bakteerissa ja puhdistettiin metalliaffiniteettikromatografialla. Uusia skTnI-sitojia verrattiin kaupalliseen skTnI:tä tunnistavaan monoklonaaliseen vasta-aineeseen (engl. monoclonal antibody, Mab). Biotinyloitujen sitojien ominaisuuksia, kuten kykyä tunnistaa skTnI:tä, tutkittiin kaksipuoleisella immunomäärityksellä. Määrityksen leimavasta-aineena toimi kaupallinen europium-leimattu skTnI-spesifinen Mab.
Saatujen tulosten perusteella jokainen 12 sitojavasta-aineesta kykeni tunnistamaan näyteperäistä skTnI:tä ja vain kahdella sitojista esiintyi ristireagointia cTnI:n kanssa. Lisäksi uudet sitojat mahdollistivat jopa 10 kertaa paremman analyyttisen herkkyyden kuin verrokkina käytetty Mab-sitoja (1,4 ng/ml). Lopputyössä tuotetut sitojat ovat täten osoittautuneet lupaaviksi herkän ja luotettavan skTnI-määrityksen aikaansaamiselle.