Uuden fibronektiinireseptorin embigiinin toiminta ja sijainti kudoksissa

Abstract

Embigiini on transmembraaninen glykoproteiini, joka kuuluu immunoglobuliinisuperperheeseen. Embigiini koostuu kahdesta solun ulkoisesta immunoglobuliinidomeenista ja sillä on lyhyt solun sisäinen häntä. Embigiiniä on havaittu ilmentyvän erityisesti hiiren sikiön kehityksen aikana, mutta sen sijainti kudoksissa yleisesti on vielä huonosti tunnettu. Embigiinin tarkkaa toimintamekanismia tai mikä sen tehtävä solussa on ei vielä tiedetä, mutta sen epäillään vaikuttavan solujen erilaistumiseen, jakautumiseen ja solu-soluväliaine vuorovaikutuksiin. Ryhmämme aikaisemman tutkimuksen mukaan embigiinin on todettu tarttuvan proteiinitasolla erityisesti fibronektiiniin. Hiiren embigiinin toimintaa tutkittiin solutason adheesiokokeilla käyttäen endogeenistä embigiiniä ilmentäviä hiiren ihon keratinosyyttejä. Näiden solujen käyttäytymistä seurattiin, kun embigiinin tuottoa vähennettiin RNA-interferenssillä tai lisättiin tuottovektorilla. Solujen tarttumista seurattiin xCELLigence laitteella, joka mittaa solun kiinnittymisestä ja leviämisestä johtuvaa sähkövirran muutosta kasvatusalustalla. Adheesiokokeiden lisäksi embigiinin funktiota pyrittiin selvittämään täysikasvuisista villityypin sekä embigiini poistogeenisistä hiiristä otettujen tiettyjen kudosnäytteiden avulla. Näytteistä selvitettiin, missä kudoksissa embigiiniä ilmennetään eristämällä hiiren elimistä RNA sekä proteiinit ja katsomalla havaitaanko niissä embigiiniä PCR- sekä western blot -menetelmillä. Tämän lisäksi embigiinin tarkempaa sijaintia kudoksissa tutkittiin immunofluoresenssimikroskopian avulla hiiren elimistä tehdyistä leikkeissä. Embigiinin vaikutusta solujen jakautumiseen tutkittiin seuraamalla stabiilisti embigiiniä yliekspressoivien solujen kasvua. Tutkimuksessa solujen todettiin tarttuvan embigiinivälitteisesti fibronektiiniin. Solujen tarttuminen oli heikompaa fibronektiinillä päällystettyyn kasvatusalustaan, kun embigiinin tuotto hiljennettiin ja voimakkaampaa, kun sitä lisättiin. Kudoksissa embigiiniä havaittiin useissa elimissä ja erityisen todennäköisesti keuhkoissa, ihossa, lisäkiveksissä sekä munuaisissa. Kasvatuskokeissa embigiinin todettiin hidastavan solujen jakautumista.