Sumolaatio ja Notch2 lihassolujen erilaistumisessa ja mekaanisessa stressissä

Abstract

Sumolaatio, Notch-signalointi ja mekaaninen stressi liittyvät lihassolujen erilaistumiseen. Erikoistyössä tutkittiin sumolaation ja Notch2:n tasojen muutoksia hiiren lihassolujen myoblastien erilaistumisen ja mekaanisen stressin aikana. Myoblastit indusoitiin erilaistumaan alentamalla kasvatusliuoksen seerumitasoa ja soluista tutkittiin sumolaation, Notch2:n, desmiinin, myogeniinin ja Troponiini T:n tasot. Erilaistumattomat solut altistettiin mekaaniselle stressille ja näytteistä tutkittiin sumolaation ja Notch2:n tasot. Näiden kokeiden pohjalta solut indusoitiin erilaistumaan ja erilaistumisen eri aikapisteissä ne altistettiin mekaaniselle stressille. Kokeiden näytteet analysoitiin Western blot -menetelmällä. Erilaistumisessa sumolaation taso nousi 24 tunnin kohdalla, jonka jälkeen se alkoi laskea, jolloin Notch2:n taso taas nousi. Kun sumolaatio alkoi jälleen nousta erilaistumisen loppuvaiheessa, Notch2:n taso laski. Desmiinin tasot kasvoivat tasaisesti erilaistumisen aikana, kun taas myogeniini ja Troponiini T alkoivat ilmetä Notch2:n nousun jälkeen, kun Notch2 oli laskussa. Erilaistumattomissa soluissa mekaaninen stressi ei juuri vaikuttanut Notch2:n tasoihin, mutta sumolaation taso nousi noin 30 min kohdalla. Sumolaation ja Notch2:n tasojen muutokset mekaanisessa stressissä erosivat solujen erilaistumisasteen mukaan. Erilaistumattomissa soluissa sumolaatiotaso nousi vasteena mekaaniseen stressiin, erilaistumisen käynnistyttyä stressi alensi sumolaatiota. Notch2:n, jonka tasoihin mekaaninen stressi ei juuri vaikuttanut erilaistumattomissa soluissa, tasot laskivat huomattavasti 72 tuntia erilaistuneiden solujen stressissä. Desmiinin tasot taas saattoivat laskea hieman erilaistumattomien ja erilaistumisen alkuvaiheessa olevien solujen mekaanisessa stressissä, mutta loppuvaiheessa mekaaninen stressi nosti desmiinin tasoja selvästi. Sumolaation ja Notch2:n tasot näyttävät muuttuvan päinvastaisesti, mutta erilaistumisen käynnistäneissä soluissa molempien tasot laskivat vasteena mekaaniseen stressiin, kun taas desmiinin taso nousi jyrkästi. Notch2:n sumolaatiota tulisi tutkia vielä immunosaostuksella, jonka optimointi aloitettiin, jotta voitaisiin päätellä sumolaation säätelevän Notch2:ta. Tiedosta näiden välisestä yhteydestä voisi olla hyötyä esimerkiksi regeneratiivisessa lääketieteessä.