Maksan sinusoidaalisten endoteelisolujen whole mount -värjäys ja immunofenotyypitys hiiren alkionkehityksen aikana

Abstract

Nykyaikaisen tiedon mukaan elimistön makrofagit ovat peräisin kolmesta eri lähteestä; alkion ruskuaispussista ja maksasta sekä aikuisen luuytimestä. Kudoksissa alkioaikaiset makrofagit muodostavat populaatioita alkuperänsä, toiminta ja sijaintinsa mukaan (kudoskohtaiset makrofagit). Alkioaikana maksassa muodostuvat monosyytit kulkeutuvat verenkierron mukana kudoksiin erilaistuen niissä makrofageiksi. Läpäistäkseen maksan kapillaarit, sinusoidit, monosyyttien pitää läpäistä sinusoidaalisten endoteelisolujen muodostama endoteeli. Sinusoidaalissa endoteelisoluissa on aukkoja, fenestroja, joita peittää Plvap-proteiinista muodostuva kalvo. Pia Rantakarin ryhmän tutkimusten mukaan Plvap-proteiini säätelee monosyyttien kulkeutumista endoteelisolujen läpi alkionkehityksen aikana. Monosyyttien ja sinusoidaalisten endoteelisolujen väliset molekulaariset vuorovaikutukset ovat kuitenkin toistaiseksi tuntemattomia.

Tutkimuksen tarkoituksena oli optimoida maksan sinusoidaalisten endoteelisolujen, vaskulaaristen endoteelisolujen ja Plvap-proteiinin immunofluoresenssivärjäys whole mount -menetelmällä ja havainnoida sinusoideissa tapahtuvia muutoksia alkionkehityksen aikana. Lisäksi tarkoituksena oli optimoida maksakudoksen käsittely virtaussytometriaan sinusoidaalisten endoteelisolujen fenotyypitystä ja solujen lajittelua varten. Tavoitteena oli selvittää normaalisti Plvap-proteiinia ilmentävien hiirten alkion maksan sinusoidaalisten endoteelisolujen fenotyyppi eri ikäpisteissä Plvap-proteiinin ilmentymisen suhteen virtaussytometrilla ja lajitella sekä kerätä talteen sinusoidaaliset endoteelisolut heterogeenisesta solususpensiosta spesifisten vasta-aineiden avulla.

Tämän Pro gradun -tulokset vahvistavat käsitystä siitä, että Plvap-proteiinin ilmentyminen paikantuu alkion maksassa sinusoidaalisiin endoteelisoluihin. Kaikissa sinusoidaalisissa endoteelisoluissa Plvap-proteiinia ei kuitenkaan ilmennetä. Tämä havaittiin kummallakin tutkimuksessa käytetyllä menetelmällä. Whole mount - värjäyksillä varmistuttiin, että endoteelisolumarkkeerien LYVE-1 ja CD31 avulla sinusoidaaliset endoteelisolut pystytään erottelemaan muista maksan soluista.