Monoklonaalisten anti-PAPP-A solukantojen in vitro vasta-ainetuotannon siirto pussimalliseen perfuusiobioreaktoriin sekä vasta-aineiden vastaavuuden varmentaminen
Huhtakallio, Mikko (2022-09-28)
Monoklonaalisten anti-PAPP-A solukantojen in vitro vasta-ainetuotannon siirto pussimalliseen perfuusiobioreaktoriin sekä vasta-aineiden vastaavuuden varmentaminen
(28.09.2022)
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
suljettu
Julkaisun pysyvä osoite on:
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2022102863636
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2022102863636
Tiivistelmä
Raskaudenaikainen plasmaproteiini A (PAPP-A) on yleisesti Downin syndrooman seulonnassa käytetty analyytti, minkä pitoisuus kohoaa raskauden etenemisen myötä. Vasta-ainepohjaista spesifistä PAPP-A-määritystä käyttäen kyetään selvittämään raskaudet, joissa sikiöllä on kohonnut riski ilmentää Downin syndroomaa. 21 trisomian esiintyvyyttä sikiöllä kyetään ennustamaan äidin verinäytteen PAPP-A pitoisuuden avulla, kun pitoisuutta verrataan yhdessä muiden tekijöiden kanssa riskiennusteeseen. Seulontatestissä käytettävien vasta-aineiden tuotantomenetelmän siirto toteutettiin tämän pro gradu -tutkielman osana Wallac Oy:ssa. Kahden monoklonaalisen anti-PAPP-A vasta-ainetuotantosolukannan tuotannon siirto pussimalliseen perfuusiobioreaktoriin sekä tuotettujen vasta-aineiden vastaavuuden varmentaminen toteutettiin tuotannon kehityssuunnitelman mukaisesti.
Tutkimuksessa toteutettiin kaksi erillistä tuotantosolukasvatusta kahdessa erikokoisessa kertakäyttöisessä pussimallisessa perfuusiobioreaktorissa. Bioreaktorin toiminta perustuu keinutusliikkeen aikaansaamaan hapetukseen sekä perfuusion aikaansaamaan ravinteiden ja metaboliatuotteiden vaihtuvuuteen. Tällöin bioreaktorin kasvatusmediumi on kokonaisuudessaan otollista kasvatuspinta-alaa soluille. Tutkimuksessa käytettiin bioreaktorin omien tuotantoparametrien seurannan lisäksi ulkoista bioanalysaattoria, minkä avulla solukasvatuksen ravinteiden määrää kyettiin seuraamaan. Tuotantosolujen vasta-ainetuotantoa seurattiin läpi kasvatuksen spesifistä vasta-ainemääritystä sekä kokonais-IgG-määritystä käyttäen. Vasta-aine konsentroitiin yhdessä erässä ristivirtaussuodatinjärjestelmää käyttäen. Työssä käytettiin lisäksi natiivi-PAGE:a vasta-aineen rakenteen sekä koon määrittämistä varten.
Tutkimuksen perusteella saatiin optimoitua molempien tuotantosolukantojen kasvatusparametrit, joiden perusteella seuraavia kasvatuksia voidaan toteuttaa työssä käytettyjä menetelmiä hyödyntäen. Tutkimuksen aikana kerätyt havainnot solukantojen käyttäytymisestä mahdollistavat tulevien solukasvatusten paremman hallinnan ja tuottavuuden. Tutkimuksen tuloksena PAPP-A seulontatestien vasta-aineita voidaan jatkossa valmistaa työssä käytetyllä pussimallisella perfuusiobioreaktorilla. Tulevaisuudessa kasvatuksissa tulee vielä panostaa kasvatusmenetelmän sekä tuotantosolukantojen kasvatuksien optimoimiseen siten, että käytettävien ravinteiden määrää saataisiin laskettua ja täten tehostettua tuottavuutta.
Tutkimuksessa toteutettiin kaksi erillistä tuotantosolukasvatusta kahdessa erikokoisessa kertakäyttöisessä pussimallisessa perfuusiobioreaktorissa. Bioreaktorin toiminta perustuu keinutusliikkeen aikaansaamaan hapetukseen sekä perfuusion aikaansaamaan ravinteiden ja metaboliatuotteiden vaihtuvuuteen. Tällöin bioreaktorin kasvatusmediumi on kokonaisuudessaan otollista kasvatuspinta-alaa soluille. Tutkimuksessa käytettiin bioreaktorin omien tuotantoparametrien seurannan lisäksi ulkoista bioanalysaattoria, minkä avulla solukasvatuksen ravinteiden määrää kyettiin seuraamaan. Tuotantosolujen vasta-ainetuotantoa seurattiin läpi kasvatuksen spesifistä vasta-ainemääritystä sekä kokonais-IgG-määritystä käyttäen. Vasta-aine konsentroitiin yhdessä erässä ristivirtaussuodatinjärjestelmää käyttäen. Työssä käytettiin lisäksi natiivi-PAGE:a vasta-aineen rakenteen sekä koon määrittämistä varten.
Tutkimuksen perusteella saatiin optimoitua molempien tuotantosolukantojen kasvatusparametrit, joiden perusteella seuraavia kasvatuksia voidaan toteuttaa työssä käytettyjä menetelmiä hyödyntäen. Tutkimuksen aikana kerätyt havainnot solukantojen käyttäytymisestä mahdollistavat tulevien solukasvatusten paremman hallinnan ja tuottavuuden. Tutkimuksen tuloksena PAPP-A seulontatestien vasta-aineita voidaan jatkossa valmistaa työssä käytetyllä pussimallisella perfuusiobioreaktorilla. Tulevaisuudessa kasvatuksissa tulee vielä panostaa kasvatusmenetelmän sekä tuotantosolukantojen kasvatuksien optimoimiseen siten, että käytettävien ravinteiden määrää saataisiin laskettua ja täten tehostettua tuottavuutta.