Organoelohopea-aptameerit LA-ICP-MS-merkkiaineina
Sarin, Ida (2024-07-22)
Organoelohopea-aptameerit LA-ICP-MS-merkkiaineina
(22.07.2024)
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
avoin
Julkaisun pysyvä osoite on:
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2024080263274
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2024080263274
Tiivistelmä
Aptameerit ovat yksijuosteisia DNA- ja RNA-molekyylejä, joilla on kyky sitoutua lujasti kohteeseensa. Sitoutumisominaisuuksiensa vuoksi aptameerit ovat kiinnostava kohde erilaisiin lääkekehityksen sovelluksiin. Aptameerit valmistetaan SELEX-menetelmällä ja niiden ominaisuuksia voidaan muokata monin eri tavoin.
LA-ICP-MS-kuvantaminen (eng. Laser inductively coupled plasma mass spectrometry) on menetelmä, jolla voidaan kuvantaa alkuaineiden jakautumista kiinteissä näytteissä. Menetelmässä näytettä käsitellään korkeaenergisellä lasersäteellä. Laser irrottaa näytteestä hiukkasia, jotka kuljetetaan eteenpäin ionisoitavaksi ICP:lle ja siitä eteenpäin analysoitavaksi MS-laitteistolle. Analyysin pohjalta voidaan muodostaa korkearesoluutioisia karttoja näytteen alkuainekoostumuksista.
Tämän työn tarkoituksena oli valmistaa organoelohopealeimattu aptameeri ja soveltaa sitä LA-ICP-MS-kuvantamisessa. Aptameeriksi valikoitui tunnettu aptameeri, jonka kohteena on syöpäsolun pintaproteiinit. Organoelohopealeima olisi mahdollista havaita LA-ICP-MS-menetelmällä. Jos tällainen leima olisi kiinnitettynä aptameeriin olisi mahdollista paikantaa aptameeri ja näin ollen myös aptameerin kohde.
Aptameerit valmistettiin kiinteän kantajan menetelmällä automaattisella DNA/RNA- syntetisaattorilla. Syntetisoituun aptameeriin konjugoitiin linkkerin välityksellä organoelohopea-aldehydi. Organoelohopea-aldehydin liittämisessä hyödynnettiin vakiintunutta oksimaatioreaktiota. Aptameerien HPLC-puhdistuksessa oli haasteita mutta oikeanlaisen kolonnin avulla puhdistus onnistuttiin suorittamaan. Aptameerit karakterisoitiin massaspektrometrisesti. Valmistetun organoelohopea-aptameerin detektioraja määritettiin LA-ICP-MS menetelmällä käyttäen matriisina hiiren aivokudosta. Mittausten perusteella todettiin, että jo 5 nM laimennoksella saadaan selkeästi taustasta erottuva signaali elohopeasta.
LA-ICP-MS-kuvantaminen (eng. Laser inductively coupled plasma mass spectrometry) on menetelmä, jolla voidaan kuvantaa alkuaineiden jakautumista kiinteissä näytteissä. Menetelmässä näytettä käsitellään korkeaenergisellä lasersäteellä. Laser irrottaa näytteestä hiukkasia, jotka kuljetetaan eteenpäin ionisoitavaksi ICP:lle ja siitä eteenpäin analysoitavaksi MS-laitteistolle. Analyysin pohjalta voidaan muodostaa korkearesoluutioisia karttoja näytteen alkuainekoostumuksista.
Tämän työn tarkoituksena oli valmistaa organoelohopealeimattu aptameeri ja soveltaa sitä LA-ICP-MS-kuvantamisessa. Aptameeriksi valikoitui tunnettu aptameeri, jonka kohteena on syöpäsolun pintaproteiinit. Organoelohopealeima olisi mahdollista havaita LA-ICP-MS-menetelmällä. Jos tällainen leima olisi kiinnitettynä aptameeriin olisi mahdollista paikantaa aptameeri ja näin ollen myös aptameerin kohde.
Aptameerit valmistettiin kiinteän kantajan menetelmällä automaattisella DNA/RNA- syntetisaattorilla. Syntetisoituun aptameeriin konjugoitiin linkkerin välityksellä organoelohopea-aldehydi. Organoelohopea-aldehydin liittämisessä hyödynnettiin vakiintunutta oksimaatioreaktiota. Aptameerien HPLC-puhdistuksessa oli haasteita mutta oikeanlaisen kolonnin avulla puhdistus onnistuttiin suorittamaan. Aptameerit karakterisoitiin massaspektrometrisesti. Valmistetun organoelohopea-aptameerin detektioraja määritettiin LA-ICP-MS menetelmällä käyttäen matriisina hiiren aivokudosta. Mittausten perusteella todettiin, että jo 5 nM laimennoksella saadaan selkeästi taustasta erottuva signaali elohopeasta.