Luustolihasvauriot ja niiden merkkiaineet sekä faaginäyttötekniikalla uusia vasta-aineita luustolihasperäiselle troponiini I:lle
| dc.contributor.author | Lammi, Susanna | |
| dc.contributor.department | fi=Biokemian laitos|en=Department of Biochemistry| | - |
| dc.contributor.faculty | fi=Luonnontieteiden ja tekniikan tiedekunta|en=Faculty of Science and Engineering| | - |
| dc.contributor.studysubject | fi=Molecular Biotechnology and Diagnostics|en=Molecular Biotechnology and Diagnostics| | - |
| dc.date.accessioned | 2018-02-27T13:29:18Z | |
| dc.date.available | 2018-02-27T13:29:18Z | |
| dc.date.issued | 2018-02-27 | |
| dc.description.abstract | Troponiinit I, T ja C ovat poikkijuovaisten lihasten (sydän- ja luustolihakset) rakenneproteiineja, jotka säätelevät lihasten supistumista. Sydän- ja luustolihasten vaurioitumisen seurauksena troponiineja vapautuu verenkiertoon, josta niitä pystytään mittaamaan immunomääritysten avulla. Koska troponiinit I ja T ovat erilaisia luustolihaksissa (engl. skeletal troponin, skTn) ja sydänlihaksessa (engl. cardiac troponin, cTn), pidetään niitä varsin spesifisinä merkkiaineina. cTnI ja cTnT ovat vakiinnuttaneet asemansa sydäninfarktin merkkiaineina. Toisaalta skTnI:tä pidetään mahdollisena merkkiaineena luustolihassairauksien diagnosoinnissa, mutta tutkimusta asiasta on vähän. Kaupallisia skTnI-määrityksiä ei ole, eikä tällä hetkellä markkinoilla ei ole juurikaan skTnI-spesifisiä vasta-aineita. Luustolihasperäisen troponiini I:n käyttöä mahdollisena luustolihasvaurion spesifisenä merkkiaineena ei ole tutkittu paljon. Osasyynä tähän on spesifisten vasta-aineiden puute. Nykyään uusia vasta-aineita etsitään ja tuotetaan erilaisin in vitro -tekniikoin, joista faaginäyttötekniikka on tehokkuuden ja yksinkertaisuuden vuoksi yksi parhaimmista. Sen avulla voidaan tunnistaa ja löytää laajoista rekombinanttisista vasta-ainekirjastoista erittäin korkean affiniteetin omaavia vasta-aineita erilaisia molekyylejä vastaan. Uusien skTnI-spesifisten vasta-aineiden avulla pystyttäisiin kehittämään herkkiä skTnI-spesifisiä määrityksiä mittaamaan muun muassa skTnI-pitoisuudet terveiden ja sairaiden verestä. Tätä kautta pystyttäisiin tutkia skTnI:n asemaa kliinisenä merkkiaineena ja mahdollistaa entistä spesifisimpien vasta-aineiden ja herkkien määritysten luominen kaupallisiin tarkoituksiin. Työssä etsittiin faaginäyttötekniikan avulla uusia skTnI:n tunnistavia vasta-aineita, jotka mahdollistaisivat herkän skTnI-immunomäärityksen kehittämisen. Vasta-aineet rikastettiin Turun yliopistossa valmistetuista synteettisistä vasta-ainekirjastoista faaginäyttötekniikalla. Rikastetuista kirjastoista eristettiin 396 vasta-ainesitojaa, jotka kloonattiin tuottovektoriin scFv-sitojavasta-aineiden (engl. single chain variable fragment, scFv) tuottamiseksi. Parhaat vasta-ainesitojat seulottiin mittaamalla niiden aktiivisuus skTnI:tä ja ristireaktiivisuus cTn:tä vastaan immunomäärityksissä. Tulosten perusteella valittiin 75 vasta-ainesitojaa, jotka sekvensoitiin ja FASTR-kloonattiin Fab-vasta-aineita (engl. fragment antigen-binging, Fab) tuottavaan muotoon. Myös Fab-vasta-aineiden aktiivisuus skTnI:tä ja ristireaktiivisuus cTn:tä vastaan selvitettiin immunomäärityksin sekä sekvensoitiin. Valituista 75 scFv-sitojasta 60 vasta-ainesitojaa osoittautui erilaiseksi CDR-H3 loopinsa perusteella. Fab-muodossa olevat vasta-aineet tunnistavat skTnI:tä heikommin kuin scFV-muodossa olevat vasta-aineet. | - |
| dc.format.content | abstractOnly | - |
| dc.identifier.olddbid | 161324 | |
| dc.identifier.oldhandle | 10024/144619 | |
| dc.identifier.uri | https://www.utupub.fi/handle/11111/7906 | |
| dc.language.iso | fin | - |
| dc.publisher | fi=Turun yliopisto|en=University of Turku| | - |
| dc.source.identifier | https://www.utupub.fi/handle/10024/144619 | |
| dc.title | Luustolihasvauriot ja niiden merkkiaineet sekä faaginäyttötekniikalla uusia vasta-aineita luustolihasperäiselle troponiini I:lle | - |
| dc.type.ontasot | fi=Pro gradu -tutkielma|en=Master's thesis| | - |