Potilasläheisen intakti-PSA-immunomäärityksen kehittäminen eturauhassyövän diagnostiikkaan

Abstract

Eturauhassyöpä on miesten yleisin syöpä, johon Suomessa sairastuu vuosittain noin 5000 miestä. Taudin diagnosoinnissa käytetään usein apuna verinäytteistä mitattavia biomerkkiaineita, ja vakiintuneena menetelmänä on prostataspesifisen antigeenin (engl. prostate-spesific antigen, PSA) mittaus. PSA ei kuitenkaan ole eturauhassyöpäspesifinen, sillä sen pitoisuutta veressä nostaa myös esimerkiksi eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu. Käyttämällä kaikkia PSA:n muotoja tunnistavan kokonais-PSA-testin lisäksi myös muita PSA:n muotoja, kuten esimerkiksi vapaata PSA:ta tai erästä vapaan PSA:n muotoa intakti-PSA:ta mittaavia testejä, saadaan syövän veridiagnostiikasta tehokkaampaa ja tarkempaa. Tarkempien verinäyteanalyysiin perustuvien diagnostisten testien myötä voitaisiin tulevaisuudessa vähentää tarpeettomia kudosnäytteiden ottoja ja kallista kuvantamisdiagnostiikkaa, joita nykyisin käytetään jatkotutkimus-toimenpiteinä veridiagnostiikan jälkeen. Lopputyön tavoitteena oli kehittää potilasläheiseen diagnostiikkaan soveltuva, nopea vapaan PSA:n intaktia muotoa (I-PSA) tunnistava immunomääritys, jossa määrityksen kaikki reagenssit on kuivattu määritysastiaan.

Työssä streptavidiinipinnoitetun 96-mikrotiitterilevyn kaivoihin kuivattiin biotinyloidun, vapaata PSA:ta tunnistavan sitojavasta-aineen lisäksi määrityspuskuri ja 9-hampaiseen α-galaktoosi-europium3+-kelaattiin konjugoitu monoklonaalinen anti-I-PSA-vasta-aine. Näytetilavuus oli 10 µl reaktion kokonaistilavuuden ollessa 20 µl. Leimamolekyyli mahdollisti europiumin luminesenssin mittaamisen määrityskaivon kuivalta pinnalta Victor-fluoromerilla (PerkinElmer, Wallac) aikaerotteista mittaustapaa käyttäen. Määrityksen analyyttinen herkkyys ja kinetiikka määritettiin mittaamalla eri pitoisuuksia puskuriin laimennettua rekombinanttista proPSA-antigeenia eri aikapisteissä. Työssä tutkittiin nopean 10 minuutin kuivareagenssimäärityksen suorituskykyä myös mittaamalla I PSA-arvoja plasmanäytteistä ja vertaamalla tuloksia kaksi tuntia kestävän verrokkimäärityksen tuloksiin.

Kun I-PSA-määrityksen signaalitasoja tarkasteltiin eri aikapisteissä, havaittiin että määritys on mahdollista suorittaa nopeana, jopa 10 minuutin määrityksenä. Kehitetyn kuivareagenssi-I-PSA-immunomäärityksen analyyttinen herkkyys oli 10 minuutin määrityksessä 0,37 µg/l. Samalla määrityksellä ilman reagenssien kuivausta päästiin herkkyyteen 0,091 µg/l. Kuivareagenssimääritys vaatii herkkyyden parantamiseksi vielä määrityksen eri osa-alueiden optimointia.