Maksan sinusoidaalisten endoteelisolujen whole mount -värjäys ja immunofenotyypitys hiiren alkionkehityksen aikana
2.06 MB
avoin
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
Lataukset673
Pysyvä osoite
Verkkojulkaisu
DOI
Tiivistelmä
Nykyaikaisen tiedon mukaan elimistön makrofagit ovat peräisin kolmesta eri lähteestä;
alkion ruskuaispussista ja maksasta sekä aikuisen luuytimestä. Kudoksissa alkioaikaiset
makrofagit muodostavat populaatioita alkuperänsä, toiminta ja sijaintinsa mukaan
(kudoskohtaiset makrofagit). Alkioaikana maksassa muodostuvat monosyytit
kulkeutuvat verenkierron mukana kudoksiin erilaistuen niissä makrofageiksi.
Läpäistäkseen maksan kapillaarit, sinusoidit, monosyyttien pitää läpäistä sinusoidaalisten
endoteelisolujen muodostama endoteeli. Sinusoidaalissa endoteelisoluissa on aukkoja,
fenestroja, joita peittää Plvap-proteiinista muodostuva kalvo. Pia Rantakarin ryhmän
tutkimusten mukaan Plvap-proteiini säätelee monosyyttien kulkeutumista
endoteelisolujen läpi alkionkehityksen aikana. Monosyyttien ja sinusoidaalisten
endoteelisolujen väliset molekulaariset vuorovaikutukset ovat kuitenkin toistaiseksi
tuntemattomia.
Tutkimuksen tarkoituksena oli optimoida maksan sinusoidaalisten endoteelisolujen,
vaskulaaristen endoteelisolujen ja Plvap-proteiinin immunofluoresenssivärjäys whole
mount -menetelmällä ja havainnoida sinusoideissa tapahtuvia muutoksia
alkionkehityksen aikana. Lisäksi tarkoituksena oli optimoida maksakudoksen käsittely
virtaussytometriaan sinusoidaalisten endoteelisolujen fenotyypitystä ja solujen lajittelua
varten. Tavoitteena oli selvittää normaalisti Plvap-proteiinia ilmentävien hiirten alkion
maksan sinusoidaalisten endoteelisolujen fenotyyppi eri ikäpisteissä Plvap-proteiinin
ilmentymisen suhteen virtaussytometrilla ja lajitella sekä kerätä talteen sinusoidaaliset
endoteelisolut heterogeenisesta solususpensiosta spesifisten vasta-aineiden avulla.
Tämän Pro gradun -tulokset vahvistavat käsitystä siitä, että Plvap-proteiinin
ilmentyminen paikantuu alkion maksassa sinusoidaalisiin endoteelisoluihin. Kaikissa
sinusoidaalisissa endoteelisoluissa Plvap-proteiinia ei kuitenkaan ilmennetä. Tämä
havaittiin kummallakin tutkimuksessa käytetyllä menetelmällä. Whole mount -
värjäyksillä varmistuttiin, että endoteelisolumarkkeerien LYVE-1 ja CD31 avulla
sinusoidaaliset endoteelisolut pystytään erottelemaan muista maksan soluista.