Proteiinien sitomiskapasiteetin kasvattaminen streptavidiiniperusteisissa immunomäärityksissä
Ladataan...
402.32 KB
suljettu
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
Lataukset1
Pysyvä osoite
Verkkojulkaisu
DOI
Tiivistelmä
Kiintokantajaperusteiset immunomääritykset ovat molekyylien havaitsemiseen käytettäviä vasta-aineen ja antigeenin sitoutumisreaktioon perustuvia menetelmiä, joissa sitojavasta-aine immobilisoidaan kiinteään pintaan. 1980-luvusta lähtien immunomäärityksissä on hyödynnetty streptavidiinin ja biotiinin välistä voimakasta sitoutumista adsorboimalla streptavidiini kiintokantajalle ennen sitojavasta-ainetta.
Immunomääritykset jaetaan immunometrisiin ja kilpaileviin määrityksiin sen perusteella, käytetäänkö signaalin tuottamiseen antigeeniin sitoutuvaa leimavasta-ainetta vai sitojavasta-aineeseen sitoutuvaa leimattua analyyttianalogia. Immunomääritykset voivat olla heterogeenisiä, jolloin sitoutumattomat ja sitoutuneet reagenssit erotellaan toisistaan. Homogeeniset määritykset eivät sen sijaan vaadi erottelua. Lisäksi määrityksiä voidaan luokitella niiden leimatekniikoiden perusteella.
Yksi immunomääritysten kehityskohteista on proteiinien sitomiskapasiteetin kasvattaminen. Aktiivista sitomiskapasiteettia kasvattamalla pyritään maksimoimaan immobilisoitujen vasta-aineiden kyky sitoa analyyttiä immunomäärityksissä. Immunomääritysten sitomiskapasiteettia voidaan kasvattaa esimerkiksi erilaisilla kohdennetun biotinylaation menetelmillä, joissa vasta-aineeseen konjugoidaan biotiini haluttuun kohtaan. Tällä tavalla sitojavasta-aineet voidaan immobilisoida suunnatusti oikein päin. Menetelmän avulla immobilisoidut vasta-aineet säilyvät aktiivisina ja pystyvät sitomaan enemmän analyyttiä. Lisäksi voidaan hyödyntää vasta-ainefragmentteja, streptavidiinin muokkausta, sekä kolmiulotteisia pintarakenteita. 3D-pinnat tarjoavat suuremman pinta-alan, jolloin enemmän sitojavasta-ainetta pystyy sitoutumaan. Vasta-aineen määrän lisäys mahdollistaa aktiivisen sitomiskapasiteetin kasvattamisen. Useat tutkimukset osoittavat sitomiskapasiteetin lisäämisen kasvattavan määritysten analyyttistä herkkyyttä jopa moninkertaiseksi.