Yhdisteryhmäspesifisen UHPLC-MS/MS-menetelmän kehittäminen profisetinidiineille ja propelargonidiineille

Abstract

Proantosyanidiinit, toiselta nimeltään kondensoituneet tanniinit, ovat kasvien erikoistuneita metaboliitteja. Ne koostuvat yhdestä flavan-3-oli pääteyksiköstä ja yhdestä tai useammasta flavan-3-oli jatkoyksiköstä. Yhdestä kasvilajista löytyy tyypillisesti satojen tai jopa tuhansien oligo-ja polymeerien seos, mikä asettaa erityisiä haasteita etenkin polymeerianalytiikkaan. Lisähaasteita tulee samanaikaisesti näytteessä esiintyvistä erilaisista proantosyanidiinialaluokista. Hyvänä ratkaisuna on toiminut yhdisteryhmäspesifinen UHPLC–MS/MS-analytiikka, jolle on luotu toimivia 2D-menetelmiä prosyanidiineille ja prodelfinidiineille, mutta ei vielä propelargonidiineille eikä profisetinidiineille. Profisetinidiinit ovat tunnettuja teollisuudessa etenkin nahan parkitsemisessa. Profisetinidiinistä tekee ainutlaatuisen C5-asemasta puuttuva hydroksyyliryhmä, jolloin niitä kutsutaan myös 5-deoksiproantosyanidiineiksi. Profisetinidiinien yhdisteryhmäspesifistä LC–MS/MS-menetelmän luomista kuitenkin hankaloittaa toinen proantosyanidiinien alaluokka, propelargonidiinit, joiden jatkoyksiköillä on sama molekyylimassa (272 Da) kuin profisetinidiineillä. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli i) puhdistaa malliaineita kasvinäytteistä menetelmien kehittämiseen, ja ii) luoda yhdisteryhmäspesifiset menetelmät propelargonidiineille sekä profisetinidiineille ja varmistaa, että molemmat menetelmät havaitsevat oikean tanniiniryhmän. Profisetinidiinien malliyhdisteet eristettiin quebrachouutteesta ja propelargonidiinien pilleriviikunan lehdistä. Malliyhdisteiden avulla etsittiin molemmille tanniiniryhmille oikeat prekursori- ja tuoteionit, joille optimoitiin kartiojännitteet ja törmäysenergiat. Tutkimuksessa onnistuttiin puhdistamaan oikeita malliaineita hyödyntäen Sephadex LH-20 geelikromatografiaa. Kehitetyillä menetelmillä onnistuttiin erottamaan toisistaan molempien tanniiniryhmien pääte- ja jatkoyksiköt, mikä mahdollistaa näiden polymeeristen polyfenolien entistä tarkemman ja samalla visuaalisesti informatiivisen UHPLC–DAD–ESI–QqQ–MS/MS-analysoinnin alle 10 minuutissa.