miRNA:n kompleksinsiirtomääritys syöpädiagnostiikassa

Abstract

Syöpätautien korkea kuolleisuus johtuu usein luotettavien varhaisen vaiheen seulontamenetelmien puutteesta. Verenkierron miRNA-molekyylit ovat potentiaalisia biomarkkereita, mutta niiden pitoisuudet ovat äärimmäisen pieniä ja veri on analyyttisesti haastava matriisi. Nykyiset standardimenetelmät miRNA:n määrittämiseen, kuten käänteiskopiointi-reaaliaikainen PCR, ovat alttiita entsymaattisille virheille ja vaativat näytteen esikäsittelyä. Lisäksi kyseiset menetelmät vaativat usein monimutkaista datan normalisointia. Tutkielma käsittelee vaihtoehtona perinteisille menetelmille monistusvapaata kompleksinsiirtomääritystä, joka voi tarjota tulevaisuudessa alustan digitaaliselle luennalle sekä usean miRNA:n samanaikaiselle määritykselle. Menetelmä hyödyntää käänteisviritteisiä nanopartikkeleita leimoina sekä kaksivaiheista erotteluprosessia. Määrityksessä kohdemolekyyli ja leima muodostavat ensin kompleksin, joka kerätään ensimmäiselle sitojapinnalle. Tämän jälkeen spesifisesti sitoutunut kohdekompleksi irrotetaan pinnalta hyödyntämällä juosteen syrjäytysreaktiota, jonka jälkeen se siirretään toiselle sitojapinnalle varsinaista mittausta varten. Koska epäspesifisesti sitoutuneet leimat eivät reagoi irrotusvaiheessa, ne jäävät ensimmäiselle pinnalle ja toisen pinnan mittauksessa ei havaita ollenkaan taustasignaalia. Tämä mahdollistaa attomolaarisen herkkyyden ja tarkan sekvenssispesifisyyden ilman entsymaattista monistusta.