Onkogeenisen kRAS-proteiinin toiminnan estäminen
Ladataan...
suljettu
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
Pysyvä osoite
Verkkojulkaisu
DOI
Tiivistelmä
KRAS (Kirsten rat sarcoma) on kRAS-proteiinia tuottava geeni. kRAS-proteiini kuuluu GTPaasi superperheeseen ja sen toiminta perustuu GTP:n sitoutumiseen. KRAS-geenin aktivaatio aikaansaa useita signalointireittejä, jotka säätelevät esimerkiksi solun proliferaatiota, erilaistumista ja selviämistä. Mutaatio KRAS-geenissä johtaa GTP:n sitoutumisen lisääntymiseen ja GTP:n hydrolyysin häiriöihin, jolloin kRAS-proteiini pysyy jatkuvasti aktiivisena. Tämä johtaa aktivaatioreittien toiminnan lisääntymiseen.
Mutaatiot KRAS-geenissä aiheuttavat noin 25 % kaikista syövistä ja se on helposti mutatoituva onkogeeni. Esimerkiksi 85–90 % kaikista haimasyövistä on onkogeenisen KRAS-geenin aiheuttamia. kRAS-proteiinin syöpää aiheuttavia mutaatioita ovat G12C, G12D, G12V ja Q61. Onkogeenisella kRAS-proteiinilla on uniikki reaktiotie, jonka takia syöpien hoito on vaikeaa. kRAS-proteiinin toimintaa säätelevien lääkkeiden kehitys on haastavaa, sillä proteiinista puuttuvat esimerkiksi tyypilliset lääkkeitä sitovat kohdat.
Työn tavoitteena on löytää molekyylejä, jotka estävät syöpää aiheuttavien kRAS-mutanttien toiminnan soluissa. Tässä tutkimuksessa keskitymme G12D ja G12V mutaatioihin. Tätä varten tuotamme villityypin kRAS ja kRAS-G12V-proteiinin GST-fuusiona Escherichia coli-bakteerissa. Työssä tuotamme ja puhdistamme itse kRAS-villityypin ja kRAS-G12V-proteiinin. Proteiinit puhdistetaan yhdistämällä affiniteetti- ja kokoerottelukromatografiaa. kRAS-G12D-proteiini on kaupallinen. Yhteistyökumppanin suunnittelemien molekyylien sitoutumista KRAS proteiineihin seurataan mikroskaala termoforeesin (MST) avulla.
Tuotimme ja puhdistimme kRAS-wt ja kRAS-G12V. kRAS-G12D oli kaupallinen. Testasimme 51 ennalta seulottua molekyyliä MST:n ja DSF:n avulla. Löysimme molekyylejä, jotka sitoutuivat kRAS-proteiineihin. Näistä valitsimme sitoutumisen affiniteettia mittaaviin mittauksiin ne molekyylit, jotka sitoutuivat ainoastaan onkogeenisiin kRAS-proteiineihin.